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iFluor 647标记的鬼笔环肽具有高亮度和光稳定性，且染色反应特异性强，对比性高，具有比Actin抗体更好的染色效果，适合用作F-actin的定性和定量检测。iFluor 647鬼笔环肽染色与用于细胞分析的其他荧光染色完全兼容，包括荧光蛋白、Qdot纳米晶体和其他iFluor偶联物(包含iFluor偶联二抗)。另外，经本品结合后的F-actin仍能维持actin自身具有的许多生物学特性。且本品的结合没有物种差异性，适用性广泛。本制品以粉末小颗粒形式提供，请使用30μL的DMSO溶解配置成1mg/mL体系。

鬼笔环肽(Phalloidin)是一种来源于毒蕈类鬼笔鹅膏(Amanita phalloides)的环状七肽毒素，以高亲和力(Kd= 20 nM)选择性结合于丝状肌动蛋白F-actin，而不会与单体肌动蛋白G-actin结合，通常用来标记组织切片、细胞培养物或无细胞体系中的F-actin，从而对F-actin进行定性和定量分析。另外，鬼笔环肽衍生物也以相近的亲和力结合于大小纤维，无论是动植物来源的肌肉细胞或非肌肉细胞，按照每一个肌动蛋白亚基约与一个鬼笔环肽分子的计量比结合。且非特异性结合几乎可忽略，染色区域和非染色区域辨识度非常明显。因此，鬼笔环肽衍生物特别适合替代肌动蛋白(Actin)抗体进行相关研究。另外鬼笔环肽衍生物很小，直径约12-15?，分子量＜2000 Daltons，未标记肌动蛋白(Actin)的许多生理特性都得以维持，比如，同肌动蛋白结合蛋白如肌球蛋白，原肌球蛋白，DNase I等仍能发生反应；鬼笔环肽标记的纤维丝仍可穿透固相肌球蛋白基质；以及甘油抽提的肌纤维标记后仍可收缩等。

鬼笔环肽(Phalloidin)的结合阻止丝状肌动蛋白(微丝)的解离，稳定微丝结构，从而破坏微丝的聚合-去聚合的动态平衡。此特性使得肌动蛋白聚合发生的临界浓度(CC)降至＜1μg/mL，因此，可用作一种聚合促进剂。此外，鬼笔环肽还可抑制F-actin的ATP水解活性。

分子量	~2200
光谱特性	Ex/Em=650nm/665nm
溶解性	溶于DMSO
结构式

• 鬼笔环肽具有毒性，需小心操作(对人的半数致死剂量LD50约2mg/kg)。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  
• 本制品仅作科研用途！

• 1×PBS缓冲液，pH7.4，细胞培养级别
  
• 固定液4%多聚甲醛(不含甲醇)(溶于PBS缓冲液)
  
• 透化液Triton X-100(溶于PBS缓冲液)
  
• 牛血清白蛋白(标准级别)(货号：SY0451)
  
• DAPI染液(5mg/mL)(货号：SY0561)

• 染色液的配置
  
  • 母液的配置：使用前将本品回温至室温并简短离心，加入30μL DMSO使其充分溶解，混匀即可获得1000×iFluor 647标记鬼笔环肽母液。根据实验情况，对其分装并于-20℃避光干燥保存。
    
  • 工作液的配置：吸取1μL 1000×iFluor 647标记鬼笔环肽母液至1mL PBS(含1%BSA)缓冲液中即可得到1×工作液。
    注：不同的细胞染色情况不同，相应iFluor 647鬼笔环肽使用量也需根据不同情况而定。
• 染色步骤
  
  • 细胞培养过夜或更长，使其密度达到50～60%汇合度。
    
  • 吸掉培液，37℃预热的1×PBS(pH7.4)清洗细胞2次。
    
  • 使用溶于PBS的4%甲醛溶液进行细胞固定，室温固定10～30min。
    注：避免固定剂中含有甲醇成分，因为甲醇在固定过程中可能破坏肌动蛋白。
    
  • 室温条件下，用PBS清洗细胞2～3次，每次10min。
    可选：室温条件下，用溶于PBS的0.1% Triton X-100溶液透化处理3～5min，从而增加其通透性。
    
  • 室温条件下，用PBS清洗细胞2～3次，每次10min。
    
  • 取足够量新鲜配好的iFluor 647标记鬼笔环肽工作液以覆盖住细胞，如：100μL/孔(96孔板)，室温避光染色20～90min。
    
  • 用PBS清洗细胞3次，每次5min。
    可选：加入足量的即用型DAPI溶液对细胞核进行复染，如：100μL/孔(96孔板)，室温3～5min。用PBS清洗细胞2次，每次5min。
    
  • 于荧光显微镜或者共聚焦显微镜下进行荧光观察，选择iFluor 647激发/发射滤片(Ex/Em=650/665nm)和/或DAPI激发/发射滤片(Ex/Em=364/454nm)。